JC-1线粒体染色是一种广泛用于检测线粒体膜电△Ψm位的理想荧光探针。JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内,可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内,JC-1聚Ji在线粒体基质中形成聚合物,聚合物发出Q烈的红色荧光(Ex=585 nm, Em=590 nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失,JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中,产生绿色荧光(Ex=514 nm, Em=529 nm)。JC-1不仅可用于定性检测,因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测,因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时,只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
JC-1 用于检测细胞的线粒体膜电位时常用的浓度范围为1~20 μg/ml,对于很多细胞适宜采用的工作浓度为10 μg/ml。
使用方法:
1、染色工作液制备
2、JC-1染色步骤(流式细胞仪)
数据分析:含有红色JC-1 jù jí物的健康细胞线粒体用FL2通道检测;含有绿色JC-1单体的凋亡或不健康细胞用FL1(FITC)通道检测。
3、JC-1染色步骤(荧光显微镜)
4、JC-1染色步骤(荧光酶标仪)
数据分析:健康细胞,JC-1单体jù jí形成聚合物,线粒体呈现Q烈的红色荧光(激发波长550 nm,发射波长600 nm)。而凋亡细胞内JC-1以单体形式存在,线粒体呈Q烈的绿色荧光(激发波长485 nm, 发射波长535nm)。之后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值,用来判断细胞健康程度。
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